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La difenilammina (DPA) viene utilizzata come fissativo per colorante e antiossidante nelle applicazioni industriali, nonché come conservante nelle attività agricole. Nonostante la sua bassa tossicità per l'uomo e l'ambiente, c'è controversia sulla sua applicazione su frutta e verdura dopo la raccolta per garantire una conservazione a lungo termine. I sostenitori di un'alimentazione sicura temono che l'ingestione quotidiana di DPA, soprattutto attraverso gli alimenti destinati ai neonati, potrebbe avere effetti negativi sulla salute dei bambini. Per attenuare i potenziali effetti tossici della DPA, sia gli Stati Uniti che l'UE hanno stabilito un limite massimo di residuo (MRL) di 5 μg/g per le pere intere e un limite MRL rigoroso di 10 ng/g per tutti gli alimenti lavorati destinati ai neonati.

Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) rappresenta un'alternativa facile per l'utente ed economica ai tradizionali metodi analitici usati per il rilevamento della DPA negli alimenti, ovvero GC-MS e GC-NPD. Con Misa, il rilevamento del livello di tracce di DPA negli alimenti per l'infanzia si ottiene rapidamente e facilmente in un formato che si adatta facilmente a diverse matrici di campioni.

Questa Application Note descrive una procedura di prova simulata per rilevare il DPA nella purea di pere commercializzate come alimenti per bambini. Il test si basa sull'acquisizione di spettri SERS specifici per la difenilammina in estratti di cloroformio utilizzando Misa e nanoparticelle d'oro (Au NPs).

Per stabilire uno spettro di riferimento, è stato analizzato uno standard DPA puro (100 μg/g in etanolo) utilizzando Au NPs. Lo spettro SERS unico mostrato in Figura 1 può essere utilizzato per creare una voce nella libreria per DPA.

Figure 1. Spettro di riferimento SERS di nanoparticelle d'oro standard della difenilammina.
https://s7e5a.scene7.com/is/image/metrohm/5159_Korr?ts=1646665690148&dpr=off

Diluizioni seriali di una soluzione madre di DPA in etanolo sono state aggiunte alla purea di pere acquistata e venduta come alimenti per l'infanzia per fornire una gamma di campioni di prova: 100, 50, 25, 10, 5, 2,5 e 1 μg/g. I campioni sono stati miscelati con un vortice, quindi sono stati aggiunti 0,5 mL di cloroformio e i campioni sono stati nuovamente miscelati per 1 minuto. Dopo aver consentito la separazione di fase per 10 minuti, 100 μL dello strato inferiore di cloroformio sono stati sifonati con una pipetta e trasferiti in una fiala di vetro per il riscaldamento per evaporazione. Il residuo di estratto è stato sospeso in 450 μL di Au NP e 50 μL di 0,5 mol/L NaCl. Ciascuna fiala è stata agitata vigorosamente e immediatamente inserita nell'attacco della fiala su Misa per la misurazione.

Tabella 1. Parametri sperimentali
Strumento Acquisizione
Firmware 0.9.33 Potenza laser 5
Software Misa Cal V1.0.15 int. Ora 5 sec
Misa Fiala Allegato 6.07505.040 medie 10
Kit di identificazione - Au NP
6.07506.440 Raster SU

La sovrapposizione degli spettri corretti per la linea di base acquisiti per ciascuna concentrazione testata mostra un rilevamento di DPA ad alta risoluzione fino a 1 μg/g (figura 2).

Figure 2. Profilo spettrale SERS Gold NP per la difenilammina in purea di pere, dimostrando un rilevamento fino a 1 μg/g.

Rilevazione di difenilammina in campo

Aggiungere la pappa alla fiala di vetro fino a riempirla per circa 1/4. Utilizzando una pipetta, aggiungi il cloroformio nella stessa fiala fino a metà. Agita energicamente la miscela per 1 minuto, quindi lasciala riposare per 10 minuti per consentire la separazione. Utilizzando una pipetta, rimuovi con cura metà del strato di fondo, evitando lo strato superiore. Trasferisci questa soluzione in una fiala di vetro pulita e scalda finché non si asciuga su una piastra riscaldante (5 minuti). Utilizzando pipette pulite, aggiungi Au NP alla fiala fino a metà, poi aggiungi 2 gocce di soluzione di NaCl. Chiudi il flaconcino e agita per miscelare, quindi lascia riposare per 5 minuti prima di inserirlo nell'attacco del flaconcino su Misa per il test.

Tabella 2. Requisiti per il protocollo di test sul campo
Kit ID - Au NP 6.07506.440
include: Nanoparticelle d'oro (Au NP)
Notizia in anticipo
Pipette monouso
Fiale di vetro da 2 ml
Reagenti  
Cloroformio  
soluzione di NaCl 3 g di NaCl in 100 ml di acqua
Impostazioni di prova Utilizzo Kit ID OP su MISA

Con il rilevamento efficace e sensibile della difenilammina negli alimenti per l'infanzia, Misa ha dimostrato di essere uno strumento di controllo qualità affidabile per il monitoraggio della sicurezza alimentare, in particolare salvaguardando la salute dei bambini. Misa è un sistema portatile e completamente contenuto, ideale per i test in loco e su misura per il funzionamento in un'ampia gamma di ambienti diversi.

Inoltre, gli operatori degli impianti di trattamento dei prodotti post-raccolta che sono a rischio di un'esposizione professionale di alto livello, ad esempio, trarrebbero grandi benefici da un sistema di monitoraggio mobile per tali rischi chimici.

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