Brilliant Blue (BB) FCF, más comúnmente conocido como FD&C Blue #1, es el colorante azul más utilizado en todo el mundo para alimentos y bebidas. Es aceptado generalmente como seguro y no tóxico. Aparte de los alimentos etiquetados como orgánicos o libres de colorantes artificiales, hay pocas objeciones al uso de BB en niveles iguales o superiores a 100 μg/g en los alimentos.
Esta aplicación para Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) es única. La ventaja es doble: la detección exitosa de un colorante fluorescente y una técnica única de limpieza de la muestra que permite la detección de un objetivo que no muestra una fuerte señal SERS y que está presente en una matriz compleja. Es bien sabido que la identificación Raman puede verse superada por la fluorescencia y, a veces, SERS se puede utilizar como método alternativo de detección. Además de ser un tinte fuertemente fluorescente, BB tiene una señal SERS débil; la detección de dichos objetivos a menudo requiere una extracción extensa de muestras antes de que la señal SERS sea detectable. Si bien Misa detecta con éxito el BB en el muestreo directo, esta aplicación describe un método de extracción simple que mejora la detectabilidad del BB con Misa.
Esta nota de aplicación describe un procedimiento para la detección de BB en una mezcla de bebidas saborizadas. El ensayo se basa en la adquisición de espectros específicos de SERS para BB en extractos acuosos y de cloroformo utilizando Misa y nanopartículas de oro (Au NP).
Para establecer un espectro de referencia, se analizó el estándar de BB puro a una concentración de 500 μg/mL en agua usando Au NP. El espectro SERS único que se muestra en Figura 1 se puede utilizar para crear una entrada de biblioteca para BB.
En una prueba directa de la presencia de BB en una mezcla de bebida saborizada, se disolvieron 100 mg de mezcla de bebida «frambuesa azul» en 1 ml de agua. Se agregaron 50 μL de esta solución a un vial que contenía 450 μL de Au NP, seguido de 50 μL de 0,5 mol/L de NaCl. El vial se agitó brevemente y se insertó en el accesorio del vial en Misa para la medición.
El espectro resultante, visto en Figura 2, muestra cierta concordancia máxima con el espectro de referencia. Sin embargo, Figura 2 difiere en intensidad y forma del espectro de referencia de BB, debido a la compleja matriz de la muestra. Las señales de otros componentes de la mezcla pueden comprometer la coincidencia de bibliotecas y la identificación de objetivos; por lo tanto, se empleó un proceso de extracción simple para mejorar la señal SERS para BB.
En un vial de vidrio, se disolvieron 40 mg de muestra en 1 mL de solución de cloruro de bencetonio (2 mg/mL en agua). El bencetonio Cl es un tensioactivo catiónico que se utiliza para capturar el colorante aniónico. Se añadió cloroformo (0,5 ml) a este vial, la mezcla se agitó durante 30 segundos y luego se dejó reposar durante 5 minutos para permitir la separación de fases. Se transfirieron con cuidado con una pipeta 200 µl de la capa inferior de cloroformo a un vial nuevo, que se colocó en una placa caliente para el secado por evaporación. Posteriormente, se añadieron al residuo seco 450 μL de Au NP y 50 μL de 0,5 mol/L de NaCl. Este vial se tapó, se agitó para mezclar y se colocó inmediatamente en el accesorio del vial en Misa para la medición.
Los espectros apilados en figura 3 confirme que esta simple limpieza de muestra produce un espectro BB con un perfil mucho más cercano al espectro de referencia.
| Aparato | Adquisición | ||
|---|---|---|---|
| firmware | 0.9.33 | Potencia del láser | 5 |
| Software | MisaCal V1.0.15 | En t. Tiempo | 10 segundos |
| misa vial Adjunto archivo | 6.07505.040 | Promedios | 10 |
| Kit de identificación - Au NP |
6.07506.440 | Trama | EN |
Detección de Azul Brillante en el campo
Con el extremo grande de la cuchara, agregue 3 o 4 cucharadas de muestra a un vial de 2 ml. Con pipetas limpias para cada reactivo, agregue la solución de cloruro de bencetonio al vial hasta la mitad, seguido de 10 gotas de cloroformo. Tape y agite vigorosamente el vial para mezclar, luego deje reposar la muestra durante 5 minutos. Usando una pipeta, retire con cuidado una porción de la capa inferior y agregue 8 gotas de este extracto a una vial limpio, luego evapore el solvente calentando en una placa caliente. Llene este vial hasta la mitad con Au NP, agregue 4 gotas de solución de NaCl y luego tape y agite suavemente el vial para mezclar. Inserte en el accesorio del vial en Misa para la medición.
| Kit de identificación - Au NP | 6.07506.440 |
|---|---|
| incluye: | Nanopartículas de oro (Au NP) |
| Cucharón | |
| Pipetas desechables | |
| viales de vidrio de 2 ml | |
| Reactivos | |
| Bencetonio Cl | 0,2 g en 100 ml de agua |
| Cloroformo | |
| solución de NaCl | 3 g de NaCl en 100 ml de agua |
| Configuración de prueba | Utilizar Kit de identificación OP en MISA |
Misa confirma con éxito la presencia de un colorante fluorescente en una matriz alimentaria compleja. La identificación de Azul brillante en una mezcla de bebida con sabor es único en el sentido de que supera la fluorescencia y evita la limpieza extensa de la muestra, el procesamiento espectral avanzado y la complejidad y el costo de la instrumentación de laboratorio. Póngase en contacto con Metrohm Raman para obtener asesoramiento sobre la adaptación de su aplicación personalizada para Misa.
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