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La difenilamina (DPA, por sus siglas en inglés) se utiliza como fijador de colorantes y antioxidante en aplicaciones industriales y como conservante de productos en operaciones agrícolas. A pesar de su baja toxicidad para el ser humano y el medio ambiente, existe controversia sobre su aplicación en frutas y hortalizas en poscosecha para garantizar su almacenamiento a largo plazo. A los defensores de la seguridad alimentaria les preocupa que la ingestión diaria de DPA, en particular en los alimentos destinados a los bebés, pueda tener efectos negativos en la salud infantil. Para mitigar los efectos potencialmente tóxicos de la DPA, tanto los Estados Unidos como la Unión Europea estipulan un límite máximo de residuos (MRL, por sus siglas en inglés) de 5 μg/g para las peras enteras y un estricto MRL de 10 ng/g para todos los alimentos infantiles procesados.

Misa (Metrohm Instant SERS Analyzer) proporciona una alternativa fácil de usar y rentable a los métodos analíticos tradicionales utilizados para detectar DPA en los alimentos, como cromatografía de gases-espectroscopía de masas y cromatografía de gases-detector nitrógeno-fósforo. Con Misa, la detección de niveles de trazas de DPA en alimentos para bebés se logra rápida y fácilmente en un formato que se adapta fácilmente a diversas matrices de muestras.

Esta nota de aplicación describe un procedimiento de prueba simulado para detectar DPA en puré de peras comercializado como alimento para lactantes. El ensayo se basa en la adquisición de espectros específicos de SERS para difenilamina en extractos de cloroformo utilizando Misa y nanopartículas de oro (Au NP).

Para establecer un espectro de referencia, se analizó un estándar de DPA puro (100 μg/g en etanol) usando Au NP. El espectro SERS único que se muestra en Figura 1 se puede utilizar para crear una entrada de biblioteca para DPA.

Figure 1. Espectro de referencia SERS de nanopartículas de oro estándar de difenilamina.
https://s7e5a.scene7.com/is/image/metrohm/5159_Korr?ts=1641815393213&dpr=off

Se agregaron diluciones en serie de una solución madre de DPA en etanol a peras en puré compradas y vendidas como alimentos para bebés para proporcionar una gama de muestras de prueba: 100, 50, 25, 10, 5, 2,5 y 1 μg/g. Las muestras se mezclaron con un vórtice, luego se agregaron 0,5 ml de cloroformo y las muestras se mezclaron nuevamente durante 1 minuto. Después de permitir la separación de fases durante 10 minutos, se sifonaron 100 μL de la capa inferior de cloroformo con una pipeta y se transfirieron a un vial de vidrio para calentamiento por evaporación. El residuo del extracto se suspendió en 450 μL de Au NP y 50 μL de 0,5 mol/L de NaCl. Cada vial se agitó vigorosamente y se colocó inmediatamente en el accesorio de vial de Misa para la medición.

Tabla 1. Parámetros experimentales
Aparato Adquisición
firmware 0.9.33 Potencia del láser 5
Software MisaCal V1.0.15 En t. Tiempo 5 segundos
misa vial Adjunto archivo 6.07505.040 Promedios 10
Kit de identificación - Au NP
6.07506.440 Trama EN

La superposición de espectros corregidos de línea base adquiridos para cada concentración probada muestra detección de DPA de alta resolución de hasta 1 μg/g (Figura 2).

Figure 2. Perfil espectral Gold NP SERS para difenilamina en puré de peras, que demuestra detección de hasta 1 μg/g.

Detección de difenilamina en el campo

Agregue comida para bebés al vial de vidrio hasta aproximadamente 1/4 de su capacidad. Usando una pipeta, agregue cloroformo al mismo vial hasta la mitad. Agite la mezcla vigorosamente durante 1 minuto y luego descanse durante 10 minutos para permitir la separación. Usando una pipeta, retire con cuidado la mitad de la capa inferior, evitando la capa superior. Transferir esta solución a un frasco de vidrio limpio y caliente hasta que se seque en una placa caliente (5 minutos). Usando pipetas limpias, agregue Au NP al vial hasta la mitad, luego agregue 2 gotas de solución de NaCl. Tape el vial y agite para mezclar, luego deje reposar durante 5 minutos antes de insertarlo en el accesorio del vial en Misa para realizar la prueba.

Tabla 2. Requisitos para el protocolo de prueba de campo
Kit de identificación - Au NP 6.07506.440
incluye: Nanopartículas de oro (Au NP)
Cucharón
Pipetas desechables
viales de vidrio de 2 ml
Reactivos  
Cloroformo  
solución de NaCl 3 g de NaCl en 100 ml de agua
Configuración de prueba Utilizar Kit de identificación OP en MISA

Con una detección sensible y exitosa de difenilamina en alimentos para bebés, Misa ha demostrado ser una herramienta de control de calidad confiable para monitorear la seguridad alimentaria, especialmente para proteger la salud de los niños. Misa es un sistema portátil y completamente contenido, ideal para pruebas en el sitio y especialmente diseñado para operar en una amplia gama de entornos diferentes.

Además, los operadores de las instalaciones de tratamiento de productos agrícolas poscosecha que están en riesgo de exposición ocupacional de alto nivel, por ejemplo, se beneficiarían enormemente de un sistema de monitoreo móvil para tales peligros químicos.

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